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nanostring(NanoString RNA)

wwwnzt88com3年前 (2022-07-01)生活169
<h2>DNA绝对定量要怎么进行?

拷贝数计算根据下面就可以,很简单的。拷贝数=(质量÷分子量)×6.0e+23。

每个碱基的平均分子量是324.5,质粒的分子量是324.5*3560*2=2310440,10μg质粒的摩尔数是10/2310440/1000000=4.328e-12,一摩尔等于6.023e+23,则10μg质粒有4.328e-12*6.023e+23=2.607e+12拷贝。

一对碱基的分子量为660Da,重量为1e-15μg,则10μg质粒拷贝数=10/(1e-15*3560)=2.7e+12分子。

例如pGEM-T载体长3003bp,插入的目的片断长162bp,每个碱基的平均分子量是330,(每对碱基/bp是660,)质粒原液约250μg/mL,阿弗加德罗常数(每mol的微粒数)是6.02e+23/mol。那么每2μl的绝对模板数量是:=14.4e+10所以,10-4~10-7质粒的模板分子数是14.4e+6~3。简单的说:每ul质粒拷贝数=(质量/分子量)x(6.0e+23)=[质粒浓度(ng/ul)x1ul]x10-9/[(质粒分子量+插入片段分子量)x660]x(6.0e+23个/mol)。

<h2>nanostring技术能检测多少基因

1,分子杂交技术,(包括southern杂交,northern杂交,基因芯片等)

分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA.这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针.探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等.由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,最后可用不同的检测方式进行检测,发光检测和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下

2,基于DNA结合蛋白的方法

Threshold(R)Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA的单抗.检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,最后放于有尿素溶液的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测残余DNA含量的目的.

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